活性氧（ROS）检测方法：个人型新一代流式细胞仪
活性氧（Reactive oxygen species，ROS），是生物有氧代谢的副产物，包括氧离子、过氧化物和含氧自由基等。越来越多的研究证明，ROS是多个信号通路的信使分子，可能触发或者直接与包括癌症、神经退行性疾病，纤维化，心血管等疾病相关。监测ROS的水平，将有助于阐明疾病机理并可能引入新的治疗方法。
流式细胞荧光分选技术（FACS）主要利用细胞内的荧光和散光（LS）信号对悬浮的活细胞自动计数、筛选。其最主要的元件包括一个激光器和两个检测器（一个用于荧光，一个用于LS）。荧光探针的发展使得该技术可以应用于检测细胞内ROS，并由于结果准确，重复性高，已经成为监测活性氧的主要技术。
然而，传统流式细胞仪通常作为平台仪器需要满足众多实验需求，排队周期过长，操作复杂，限制了科研人员的使用。今天小编为大家介绍新一代个人型双荧光通道细胞分析仪—Moxi Go II。这款仪器小巧轻便，操作简单，无论是FACS的专家还是刚上手的小白，都能轻松在自己的实验台上顺利完成细胞内ROS的精准检测。我们来看一组实验。
化合物TBHP（叔丁基过氧化氢）能够诱导细胞的氧化应激反应，产生活性氧；NAC（ N-乙酰半胱氨酸），则是一种常用的抗氧化剂，能够清除细胞内的自由基。实验采用Thermo CellROX® Assay Kit，针对Jurkat E6-1细胞，设计三组对照试验：1. 阴性对照（健康细胞不处理） 2. TBHP处理的细胞 3. NAC预保护、TBHP 处理的细胞。使用Moxi Go II检测每组细胞活性氧生成情况。结果输出界面如下：
由图知Moxi Go II支持输出散点图（CellROX® Orange荧光强度 vs直径）和直方图（细胞数量 vs CellROX® Orange荧光强度）。左侧两张图清楚显示，相比健康对照组（TBHP-/NAC-，灰）细胞，TBHP（TBHP+/NAC-，紫/红）处理组明显发生荧光的右移，指示TBHP的活性氧诱导功能。右侧两张图表明NAC预处理组（TBHP+/NAC+, 灰）相比单独用TBHP （TBHP+/NAC-，紫／红）处理组荧光左移，与NAC对TBHP诱导的ROS的预清除理论结果相符。
相同的试验在HEK-293细胞中重复得到同样准确的结果：
能够得到这样漂亮的结果，是因为Moxi Go II具备大流式的核心组件：一个高强度的488nm (Blue) 激光器， 2个PMT检测器（525/45nm，561nm/LP）。兼容常用荧光染料,像藻红蛋白（PE），碘化丙啶（PI）和RFP（dsRed或tdTomato）等。
Moxi GO II以行业标准的FCS 3.1格式保存数据（可通过USB随时随地通过外部驱动器访问），因此可以轻松地将其导入流式分析软件中，以进行更高级的数据可视化和分析。下图针对HEK-293（左）和Jurkat E6-1（右）细胞系，简洁地显示了三种ROS状态（红色：TBHP-/NAC-，蓝色：TBHP+/NAC+和橙色：TBHP+/NAC-）。以这种形式呈现的ROS诱导剂（TBHP）和抗氧化剂（NAC）的应用效果可以同时清晰地显现出来。
实际上，除了ROS检测，Moxi Go II还可以检测细胞活性、细胞凋亡、转染效率、线粒体膜电位、胞内蛋白、细胞表面蛋白等。它的制造商美国ORFLO公司是一家专业的细胞分析仪器研发和制造商，一直为细胞和蛋白质分析行业开发功能强大但操作简单的仪器。基因有限公司是ORFLO的中国区合作伙伴，为你提供专业的技术咨询和产品服务。
References
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7. CellROX® Green and CellROX® Orange Flow Cytometry Assay Kits – User Manual - https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/cellrox_green_orange_flow_cyt_assays_man.pdf
